吸光度

以对数形式描述样品使透射光相对参考光减弱的程度。

一份核酸样品在 260 nm 给出读数后，实验人员常会立即把它换算成浓度。真正需要先确认的是：这个数字怎样由光强比值得到，又在哪些条件下才可以代表样品中的吸收物质。

从参考光与透射光开始

分光测量先获得参考条件下的辐射功率 P₀，再获得光穿过样品后的辐射功率 P。透过率 T 是 P/P₀，吸光度则把这个比值转换为十进制对数量。透射光越弱，T 越小，吸光度越高。

对数表达使光沿样品逐层衰减的过程可以转化为加和关系，也让不同光程、不同浓度之间的比较更容易建立。但仪器记录到的光强变化并不自动等于纯吸收：散射、反射、荧光和光学系统中的非目标光都可能进入结果。

什么时候可以用它估算浓度

在样品均匀、目标物种的化学状态稳定、光程已知，且光谱带宽和仪器响应满足方法要求时，Beer-Lambert 关系把吸光度与浓度、光程及摩尔吸收系数联系起来。核酸和蛋白的紫外吸收定量正是这一关系的常见应用。

浓度换算还依赖所采用的吸收系数或换算因子、样品组成以及 Blank。相同的吸光度并不意味着所有样品具有相同浓度；波长、光程、缓冲体系和物质种类改变后，数字不能脱离条件直接比较。

高读数与低读数都需要边界判断

高吸光度意味着到达探测器的目标透射光很少，此时杂散光和探测器低信号端的限制会变得突出，结果常出现表观吸光度偏低或线性受限。低吸光度端则更容易受基线漂移、Blank 差异和随机噪声影响。

浑浊样品、颗粒、气泡或不稳定液柱造成的散射也会降低透射光，但不能据此直接判断目标物浓度。面对异常谱形，应先检查全谱、Blank、样品状态与光程，再决定是否稀释、重测或改用更适合的方法。

理解吸光度的下一步，是把它与透过率、Beer-Lambert 定律、光程和杂散光放在同一个测量链条中，而不是只看单个波长上的结果。