A280 直接定量有哪些局限？

A280 适合在消光系数已知、背景干扰受控时对蛋白进行直接定量。不同蛋白的芳香族残基和二硫键组成不同，同样质量浓度不一定产生同样吸光度。

先确认蛋白身份及消光系数的单位，再检查缓冲液和共存物是否吸收紫外光。对未知混合物或粗提液，通用系数给出的结果只能作近似估计。

选择比色法时也需要检查试剂兼容性、标准蛋白与样品的响应差异，并在有效标准曲线范围内计算；更换方法不能自动消除所有偏差。